HPLCスレッド

1 ：あるケミストさん：2005/07/31(日) 17:50:57

HPLCについて語りましょう。

私はこれから研究室でHPLCを使わねばなりません。
専門は有機合成です。
基礎知識としては学部で昔やったかなというぐらいです。
何かお勧めの本はありませんか？

918 ：あるケミストさん：2009/07/23(木) 23:24:03

東ソーがHPLCから撤退……

919 ：あるケミストさん：2009/07/23(木) 23:59:58

>>916
THFが過酸化物になって、固相がやられたのでしょうか？
測定波長210nmあたりですよね？
しばらく流してもブリードが減らなければ、254nmあたりの
長波長で使うようにすればいかがでしょう？
もしLC/MSなら、MSの汚染を避けるためにも捨てたほうが
良いと思います。

920 ：あるケミストさん：2009/07/24(金) 00:52:54

>>916
たぶんTHFがぽりめってるよ。入れてたの安定剤不含かな？
もうｙきびしいわ、すてましょ。

921 ：あるケミストさん：2009/07/24(金) 00:59:54

>>918
本当？
先日のBioエキスポでは展示してたけど。通りすがりだけと結構大きなブースだった。
その場合、残っているカラムメーカーってどこ？GLサイエンスやアジレント、
Watersなんかに皆、吸収されてしまうのでしょうか？

922 ：あるケミストさん：2009/07/24(金) 07:38:06

東ソーのニュースリリースによると、装置製造から撤退しただけで、カラム製造やアジレントのシステムの販売は続けると書いてある

923 ：糖さん：2009/07/25(土) 07:19:39

東ソーさんはアミドカラムが隠れたヒット商品で売れてますので
堅調ですね。ZICよりアミドはいいですよ。
で、装置もはOEMやるんですか？・・

924 ：あるケミストさん：2009/07/26(日) 17:23:57

東ソーのアミドカラムは使ってて実際に良いのだけど
Watersもアミドカラムを出すでしょ
使ってみないことには何ともいえないけどどうだろうね

925 ：糖さん：2009/07/26(日) 19:36:39

酸性・塩基性等様々な高極性化合物に対して保持できるというヒット率という
観点で東ソーのアミドはいいと思う。どこのメーカーもヒット率で他社より
優れているというデータは見たことがない。あとはピーク形状も重要だけど。

926 ：糖さん：2009/07/27(月) 21:14:18

>>924
すいませんです。
コメントいただいていましたがUP○○カラムでのことですよね。
LCカラムでは、アミドは東ソー以外でも出しているのでしょうか？

927 ：あるケミストさん：2009/07/27(月) 21:56:56

ちなみにイオン交換と逆相のミックスってはやってんの？

928 ：916：2009/07/27(月) 22:20:05

>>919、920
あり。

929 ：あるケミストさん：2009/07/27(月) 22:24:37

さよならバリアン

930 ：あるケミストさん：2009/07/29(水) 08:32:51

>>929
Gさんは自社ブランド切り替えを今以上に積極的にやっていくでしょうね。
アジレントさんから取るとは思えません

931 ：あるケミストさん：2009/07/29(水) 19:49:36

>>927
ダイオネクスの逆相と陽イオン交換のミックス使ったけどなかなか難しいね。
移動相の塩濃度をちょっと調整するだけで保持がガラッと変わるのは面白いけどね。
化合物によってはハマればいいカラムって感じかな〜？

932 ：あるケミストさん：2009/07/30(木) 22:23:21

ZIC,アミド、シリカ、PC等いろいろな基材がHILICとしてでていますが、
その違いと使い分けを明確にしているメーカーはどこもない。
使ってみないとわからないのが現状かな。ただ、ピーク形状が各カラムで
カラム違う。これは何に起因するのか不明。・・・・
あとは、希釈溶媒でずいぶん変わるね。　　
ブリードについても結構あるカラムある。

933 ：あるケミストさん：2009/07/31(金) 19:04:27

>>931

HILICでもアニオン・カチオン両モードの場合、化合物によってはピークが
かなりブロードなる場合があります。ミックスモードの挙動は複雑です。

934 ：あるケミストさん：2009/08/02(日) 15:10:46

1290ってどう？

935 ：あるケミストさん：2009/08/02(日) 21:55:54

>>934
なにそれ？

936 ：あるケミストさん：2009/08/03(月) 23:31:11

味のＬＣ
UPLCより耐圧が高い

937 ：あるケミストさん：2009/08/03(月) 23:40:59

UPLCはカラム次第だろ

938 ：あるケミストさん：2009/08/04(火) 01:04:08

1200bar対応のカラムもでるらしいよ

939 ：あるケミストさん：2009/08/08(土) 14:28:58

>>936,938
実際の分析は1000bar以下でやるんじゃないの。そうするとUPとの耐圧の差は
その程問題にならないと思う。カラム耐久性とか分離性能とかどうかだね。

940 ：あるケミストさん：2009/08/08(土) 18:00:11

結局、Bed安定性です・・・・

941 ：あるケミストさん：2009/08/09(日) 17:55:56

やはり現時点では、海老+水U-sys+水U-colの組合せがいいが、味に期待

942 ：あるケミストさん：2009/08/13(木) 15:16:22

味は15センチの高速カラムの二本連結を推奨していくらしいが、そんな需要あるのか？

943 ：あるケミストさん：2009/08/13(木) 20:20:07

>>942

ない。ペプチドとかたんぱく等の分析でめちゃめちゃ高いピークキャパシティを
必要とする場合のみ。通常分析であれば150mmで十分。

944 ：あるケミストさん：2009/08/19(水) 17:43:35

>>930

A社と�X社は合併しても今まで通りのサービスするという案内を
顧客や販売店にしているね。訪問もして・・・
サンプルーク、ボンドエリュートをどうすみわけするのでしょうか？

945 ：870：2009/08/23(日) 16:26:44

すいません。ちょっと独力では調べ切れなかったので、また質問させてください。

「4.6 mmφだと 1.0 ml/min、3.0 mmφだと 0.4 ml/min、2.0 mmφだと 0.2 ml/min に
設定しろ。保持時間もだいたい一緒になる。」と聞いたんですが、
ポンプの限界圧以下であるならば、流速をこれ以上にしてもいいですか？
分析時間を短くしたいので、4.6 mmφの ODS カラムで 2.0 ml/min にしたいです。

あと、順相カラムは極性の化合物を分けるのに使うと聞いたのですが、
アントラセンとナフタレンを分離できるような順相カラムってありますか？
都合によりナフタレンより先にアントラセンを先に溶出させたいのです。


教えて君ですいませんが、周囲に“液クロ名人”らしき人がおらず、
ちょっと情報収集に苦戦している次第です。
ご助力のほど、よろしくお願いいたします。

946 ：あるケミストさん：2009/08/23(日) 17:17:49

ポンプとシステム、カラムの耐圧がOKなら流速上げても実用上問題は無いけど。
もちろん目的化合物がちゃんと分離するならね。

1.0 mL/minが理論段数と分析速度のバランスがとれていて経験則的に良いってだけ。


後半はわからん・・・。非極性を分けるなら逆相のほうが良い結果をもたらしそうだが。

947 ：あるケミストさん：2009/08/23(日) 18:57:45

>>945
アントラセンを先に出すには順相でしょ
一般的にはシリカカラムだから、細孔径で選ぶしかない(6と12nm)。
ナフタレンが入ってアントラセンが入らない径があればきちんと分離できる。

これでダメなら、修飾カラム(CNとか、他知らない)を使って分ける。

948 ：945：2009/08/23(日) 21:04:28

>>946
ありがとうございます。

カラムの耐圧をチェックし忘れるところでした。

>1.0 mL/minが理論段数と分析速度のバランスがとれていて経験則的に良い
こんな感じで分かりやすく書いて頂けると僕のようなペーペーには本当に助かります！


>>947
ありがとうございます。

詳細は言えなくて申し訳ありませんが、アントラセンを先に出したいので、
順相カラムはどうだろうと考えたのですが、カラム選びのポイントすら分かりませんでした。
そこで、お聞きしたいのですが、細孔系に注目するということは、
シリカゲルによる解離・吸着平衡で分けるのではなく、GPC 的なサイズ排除で
分けるということでしょうか？






厚かましくもう１個質問をさせてください。
Shodex の ODP カラムが「逆相＋サイズ排除」のミックスって書いていたのですが、
アントラセンとナフタレンは分離できそうな感じでしょうか？
ODP カラムをお使いの方がいらっしゃいましたら、是非ご教授願います。

949 ：あるケミストさん：2009/08/23(日) 21:33:55

>>947
ちょっと質問です。６０というカラムは知らないです。８０、１００、１２０
というカラムはありますが・・・国産ですか＿？
Ｋマシル？？？　　

950 ：あるケミストさん：2009/08/23(日) 23:12:11

>>948
どのぐらい液クロに金使ってる研究室かわからないけど、
これだと思うカラムがあったら試用させてもらうのが一番だと思われ。

951 ：あるケミストさん：2009/08/23(日) 23:31:56

>>948
GPCの歴史を勉強すればわかるが
単純なシリカゲルカラムであってもサイズ排除的な機構によって分離している。

6nmはYMCとかTCIでも出しているくらいだから一般的じゃないの？

逆相はお勧めしない。
アントラセンもナフタレンも極性が低いので、どうしても溶出力を高めないといけない。
するとどんな高性能なカラムを使っても、分離能が出ないんだよ。

そうそう、カラムはPhというタイプが芳香環への吸着能がある。
あと、俺の想像ではpHを変えると分離能が変わるからお試しあれ。

マルチモードは高いが、借りれるなら試すべき。

952 ：945：2009/08/24(月) 00:31:09

>>950
あり。

とりあえずメーカーさんに「こんな分離できるカラム無い？」って聞いて、
何か薦められたら、試しに使ってみます。



>>951
あり。

>単純なシリカゲルカラムであってもサイズ排除的な機構によって分離している。
初耳です。
順相カラムについては、本とか冊子とかウェブサイトとかそこそこチェックしたはずなんですが・・・。

とりあえずメーカーさんに質問をぶつけてみます。
もしかしたら順相カラムでなくて別のやつ（Ph？とかミックスモードとか）をすすめてくれるかも、
な〜んてのは虫が良すぎますかね (;^_^



2ch に HPLC スレッドがあって本当によかったです。
そして、そこに集う親切なエロイ人たちにただただ感謝するばかりです。
また何かあったら、よろしくお願いいたします。
（僕も早くエロイ人になれるようにがんばります。）

953 ：945：2009/08/24(月) 00:56:53

>>951
調べていて分かったんですが、
ODS →「ｵｸﾀﾃﾞｼﾙ基」に対して、Ph →「ﾌｪﾆﾙ基」だったんですね。
ﾌｪﾆﾙカラムなんてあるんだ・・・使ってみたい！すごくおもしろそうです。

でも、pH（ﾍﾟｰﾊｰ）の方はちょっとむずかしいです、今の溶離液条件的に考えて。

954 ：あるケミストさん：2009/08/27(木) 18:20:45

質問です。loading solventって移動層のことですか？

955 ：あるケミストさん：2009/08/27(木) 19:17:13

>>954
違う。実際に打つサンプルを溶解する溶媒のこと。
基本は初期条件の移動相を使うのが定石だが、サンプルが溶けない場合は
溶解力のある溶媒を使うこともあるから、そんときは特記することもある。

956 ：あるケミストさん：2009/08/27(木) 23:53:14

質問です。
ODSカラム、貧溶媒：メタノール、良溶媒：トルエンで、HPLC測定しても問題ないですか？

957 ：あるケミストさん：2009/08/28(金) 00:28:20

>>956
理論上は問題ないと思うが、置換に気を付けないと少しでも水が残ってたら
アウトになる可能性が高い。圧力についても未知数。
つーか、逆相で使う溶媒つーたら普通はせいぜいTHFまでだと思うけど。

トルエンが必要なほど溶出しにくいサンプルで、どうしても逆相に
こだわるのなら、もっと保持の弱いカラムを選択したらどうだろう。C8とか。

958 ：957：2009/08/28(金) 00:42:26

アホだ俺。大事なことを忘れてた。

検出はどうするんだ？ELSDとかコロナとかあるのか？
UVは使えないから注意な。

959 ：あるケミストさん：2009/08/28(金) 07:39:14

DAD!!DAD!!

960 ：あるケミストさん：2009/08/29(土) 02:55:00

>>959
ネタで言ってるんだろうか。
可視光部に吸収があるサンプルならいいけど。

961 ：あるケミストさん：2009/09/16(水) 13:48:43

最近液クロに手出したので覗いてみたけどレベル高くて付いていけねぇ

962 ：あるケミストさん：2009/09/16(水) 23:55:35

>>961
別にふつうに質問スレとして使ってもらっても構わないのだが。
手なずければ、いい装置だぜ。

963 ：あるケミストさん：2009/09/17(木) 14:42:34

どこがわからないのかわからないのれす！

964 ：あるケミストさん：2009/10/29(木) 00:51:39

初心者の質問なんですが、固相抽出カートリッジって再利用できないのでしょうか？
一度使用したやつを使ったらピーク面積が8割くらいに減ってしまいました。
液が落ちる速度も遅くなりました。
原因は何なのでしょう？どなたかお願いします。

965 ：あるケミストさん：2009/10/29(木) 12:35:47

つまり詰まり

966 ：あるケミストさん：2009/10/31(土) 16:47:37

ＯＤＳカラムの洗浄、水１００％は勧められていませんが、この理由について教えてください。

967 ：あるケミストさん：2009/11/03(火) 07:33:06

とろける