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【高い】抗体情報交換スレ【染まらん】

1 :名無しゲノムのクローンさん:2010/06/27(日) 02:29:48
抗体に関する情報を交換するスレ
例えば、こんな悩みを持ってる椰子にオヌヌメ
・マウスの抗体売ってるけど、これってウシの組織も染まるん?
・ポリクロ作りたいんだけど、その前に大腸菌がタンパク質を作ってくれません><
・この抗体、ウエスタンで最大どんだけ薄めて使うことができるん?

2 :名無しゲノムのクローンさん:2010/06/27(日) 23:36:28
タグつけてタンパク質精製する場合、楽なタグはやっぱりHisタグでしょうか?

3 :名無しゲノムのクローンさん:2010/06/28(月) 09:43:52
GSTも試してみそ

4 :名無しゲノムのクローンさん:2010/06/29(火) 09:58:33
GSTを使うメリットは何でしょうか?タグをプロテアーゼで切断して除去できるからでしょうか?
Hisタグつけたままだと、タグに対する抗体ができてしまったりするものなのでしょうか?

5 :名無しゲノムのクローンさん:2010/06/29(火) 21:40:20

ホルマリン固定で染まらなかったらメタノール固定で染めるとか、それで駄目なら他の固定法とか、
そういった染色上のテクというか、決まったルーチン的な染色テスト法ってあるんでしょうか?
あったら教えてください。

ボスが抗体キャンペーンで40種類くらい買い込んだのがあって、
全部免疫染色しろとかいうからすぐやって、言われた方法では染まりませんと言ったら、
「アホか、染まるまで違う固定法試せ! 1週間以内で」とかいわれるし、鬱になってきました。

ポスドクってマジ豚以下の扱いだと思うんだけど。
やっぱ、熱ってこういう環境で生まれるのかな。

6 :名無しゲノムのクローンさん:2010/06/29(火) 21:45:57
共局在なら、二次抗体をクロスさせれば(ry

7 :名無しゲノムのクローンさん:2010/06/29(火) 22:44:02
GSTは抗原性が高くないから、融合した方のペプチドに対する抗体はちゃんとできる。
失敗した事は無い。
マルトース結合タンパク質融合だとMBPの抗原性がやたら高くて、融合したペプチドの抗体がほとんど出来なかった
という話はきいたことがある。

8 :名無しゲノムのクローンさん:2010/06/30(水) 00:00:28
eBioscienceからヒトCD277(BTN3A1)抗体を購入しようとしたのですが、
販売中止といわれました。どこかで売ってるのを知ってる人いたら
教えてください。

9 :名無しゲノムのクローンさん:2010/06/30(水) 22:04:01
>>7 

ありがとう。では、HisタグじゃなくてGSTでやってみようかな。
あとHisタグと比べてプロトコール上のステップの多さとかはどうなんでしょ?
以前Hisタグタンパク質を精製したときは普通の実験室でやったけど、
GSTタグだとコールドルームでやらないといけないとかあるんでしょうか?
それとコスト的にはどうなんでしょう?

10 :名無しゲノムのクローンさん:2010/07/02(金) 11:25:25
DABってどうやって捨ててる?発がん性あるんでしょ?

11 :名無しゲノムのクローンさん:2010/07/22(木) 03:10:36
マウス1匹またはウサギ1羽を免役するのに大体何グラムぐらい組換えタンパク質が必要なんでしょうか?

12 :名無しゲノムのクローンさん:2010/07/22(木) 10:02:46
2kgのウサギに抗原タンパク質2mgを目安。
4回注射するとして、1回当たり0.5mgぐらい

2kgのウサギにトータル100マイクロgの抗原でも良い抗体はできる

13 :名無しゲノムのクローンさん:2010/07/22(木) 20:06:36
ォォ

14 :名無しゲノムのクローンさん:2010/07/22(木) 20:07:39
パルボウィルスに感染の恐れのある犬の血清で、ウィルスに対する抗体の有無を、
調べるにはどのような検査が必要ですか?

15 :名無しゲノムのクローンさん:2010/07/23(金) 09:39:25
卒研生のテーマに遺伝子クローニング、発現コンストラクト作成、組換え体精製、抗体作成、交差確認実験とやると
卒業までに終わらないwwwwwwwwwwwwwwwwwwww

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